7.1.4.126 스피네토람 (Spinetoram)
1) 시험법 적용범위
채소류
2) 분석원리
시료를 아세톤으로 추출한 후 흡인여과한 다음 분액깔때기에 옮겨 포화식염수와 증류수를 가하고 수산화나트륨 용액으로 pH를 조절한 후 디클로로메탄으로 분배한다. 유기용매층을 탈수, 감압농축하고 실리카 카트리지(용출용매 : 아세톤)로 정제하여 액체크로마토그래프로 측정한다.
3) 장치
가) 액체크로마토그래프/자외선흡광검출기(UV photometric detector)
4) 시약 및 시액
가) 용매 : 잔류농약 시험용 또는 이와 동등한 것
나) 물 : 증류수 또는 이와 동등한 것
다) 실리카 카트리지 : 실리카(1 g) 고정상이 충전되어 있는 일회용 카트리지(용량 6 mL) 또는 이와 동등한 것
라) 표준원액 : 스피네토람을 아세토니트릴에 녹여 1000 mg/L이 되게 한다.
마) 표준용액 : 표준원액을 각각 아세토니트릴/메탄올/1% 초산암모늄 혼합액 (45/45/10, v/v/v)에 녹여 적당한 농도로 혼합, 희석한다.
바) 기타시약 : 잔류농약 시험용 또는 특급
5) 시험용액의 조제
가) 추출검체
검체(채소류 약 1 kg을 잘 썰거나 갈은 후 그 30 g을 단다)를 균질기 용기에 달아넣고 아세톤 100 mL 및 Celite 545 한 스푼을 첨가하고 5 분간 균질화한 다음 여지가 깔려있는 부흐너깔때기로 흡인 여과한다. 여액을 분액깔때기에 옮겨 증류수 450 mL과 포화식염수 50 mL를 첨가한 후 1 N 수산화나트륨 용액을 이용하여 pH 5.5～6.6로 맞추고 디클로로메탄 100 mL을 넣고 2 분간 심하게 흔들어 정치한다. 디클로로메탄 층을 무수황산나트륨 15 g에 통과시켜 탈수한 후 다시 수용액층에 디클로로메탄 50 mL를 가하고 분배과정을 되풀이 하여 추출된 용액을 합친다. 합친 용액을 40℃이하 수욕 중에서 감압농축하여 날려버리고 헥산 10 mL로 녹인다.
나) 정제
미리 실리카 카트리지에 헥산 10 mL를 초당 2～3 방울 정도의 속도로 유출하여 활성화시킨 다음 여기에 위의 헥산용액을 카트리지 상단에 넣고 초당 1～2방울 정도의 속도로 전개 시킨 후 에틸아세테이트/헥산 혼합액 (30/70, v/v) 25 mL를 가하여 유출시켜 버리고 아세톤 40 mL로 용출시켜 받는다. 용출액을 40℃이하의 수욕조 중에서 질소를 낮은 유속으로 통과시키면서 용매를 날려 보낸 후 건고물은 아세토니트릴/메탄올/1% 초산암모늄 혼합액 (45/45/10, v/v/v) 5 mL로 정용하여 시험용액으로 한다.
6) 시험조작
가) 액체크로마토그래프의 측정조건
(1) 칼럼 : C18 (4.6 mm I.D. × 250 mm, 5 ㎛) 또는 이와 동등한 것
(2) 칼럼온도 : 40℃
(3) 이동상 : 아세토니트릴/메탄올/1% 초산암모늄 혼합액 (45/45/10, v/v/v)
(4) 이동상 유량 : 1.0 mL/min
(5) 시료주입량 : 20 μL
(6) 검출기파장 : UV 246 nm
나) 검량선의 작성
표준용액을 농도별로 일정량 취하여 액체크로마토그래프에 각각 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피이크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.
다) 표준품의 크로마토그램
그림 1. 액체크로마토그래프에서 표준품의 크로마토그램 : 스피네토람-J형(8.0 분), 스피네토람-L형(8.9 분) 20 ng
라) 정량한계
0.02 mg/kg
마) 액체크로마토그래프․질량분석의 측정조건
(1) 칼럼 : C18 (2.0 mm I.D. × 100 mm, 3 ㎛) 또는 이와 동등한 것
(2) 칼럼온도 : 40℃
(3) 이동상 : 아세토니트릴/메탄올/1% 초산암모늄 혼합액 (45/45/10, v/v/v)
(4) 이동상 유량 : 0.2 mL/min
(5) 시료주입량 : 5 μL
(6) 이온화 : ESI positive-ion mode
(7) 분자량 범위 : 500 ～ 900
(8) Capillary temperature : 350℃
(9) Cone voltage : 137 V
표 1. 액체크로마토그래프ㆍ질량분석기 분석을 위한 이온
7) 정성시험
위의 조건에서 얻어진 크로마토그램상의 피이크는 어느 측정조건에서도 표준용액 피이크의 머무름 시간과 일치하여야 한다. 주. 액체크로마토그래프․질량분석기상의 머무름 시간 및 mass spectrum으로 각 농약의 성분을 확인할 수 있다.
8) 정량시험
정성시험과 똑같은 조건에서 얻어진 시험결과에 의해 피이크 높이법 또는 피이크 면적법에 따라 정량한다.
1) 시험법 적용범위
채소류
2) 분석원리
시료를 아세톤으로 추출한 후 흡인여과한 다음 분액깔때기에 옮겨 포화식염수와 증류수를 가하고 수산화나트륨 용액으로 pH를 조절한 후 디클로로메탄으로 분배한다. 유기용매층을 탈수, 감압농축하고 실리카 카트리지(용출용매 : 아세톤)로 정제하여 액체크로마토그래프로 측정한다.
3) 장치
가) 액체크로마토그래프/자외선흡광검출기(UV photometric detector)
4) 시약 및 시액
가) 용매 : 잔류농약 시험용 또는 이와 동등한 것
나) 물 : 증류수 또는 이와 동등한 것
다) 실리카 카트리지 : 실리카(1 g) 고정상이 충전되어 있는 일회용 카트리지(용량 6 mL) 또는 이와 동등한 것
라) 표준원액 : 스피네토람을 아세토니트릴에 녹여 1000 mg/L이 되게 한다.
마) 표준용액 : 표준원액을 각각 아세토니트릴/메탄올/1% 초산암모늄 혼합액 (45/45/10, v/v/v)에 녹여 적당한 농도로 혼합, 희석한다.
바) 기타시약 : 잔류농약 시험용 또는 특급
5) 시험용액의 조제
가) 추출검체
검체(채소류 약 1 kg을 잘 썰거나 갈은 후 그 30 g을 단다)를 균질기 용기에 달아넣고 아세톤 100 mL 및 Celite 545 한 스푼을 첨가하고 5 분간 균질화한 다음 여지가 깔려있는 부흐너깔때기로 흡인 여과한다. 여액을 분액깔때기에 옮겨 증류수 450 mL과 포화식염수 50 mL를 첨가한 후 1 N 수산화나트륨 용액을 이용하여 pH 5.5～6.6로 맞추고 디클로로메탄 100 mL을 넣고 2 분간 심하게 흔들어 정치한다. 디클로로메탄 층을 무수황산나트륨 15 g에 통과시켜 탈수한 후 다시 수용액층에 디클로로메탄 50 mL를 가하고 분배과정을 되풀이 하여 추출된 용액을 합친다. 합친 용액을 40℃이하 수욕 중에서 감압농축하여 날려버리고 헥산 10 mL로 녹인다.
나) 정제
미리 실리카 카트리지에 헥산 10 mL를 초당 2～3 방울 정도의 속도로 유출하여 활성화시킨 다음 여기에 위의 헥산용액을 카트리지 상단에 넣고 초당 1～2방울 정도의 속도로 전개 시킨 후 에틸아세테이트/헥산 혼합액 (30/70, v/v) 25 mL를 가하여 유출시켜 버리고 아세톤 40 mL로 용출시켜 받는다. 용출액을 40℃이하의 수욕조 중에서 질소를 낮은 유속으로 통과시키면서 용매를 날려 보낸 후 건고물은 아세토니트릴/메탄올/1% 초산암모늄 혼합액 (45/45/10, v/v/v) 5 mL로 정용하여 시험용액으로 한다.
6) 시험조작
가) 액체크로마토그래프의 측정조건
(1) 칼럼 : C18 (4.6 mm I.D. × 250 mm, 5 ㎛) 또는 이와 동등한 것
(2) 칼럼온도 : 40℃
(3) 이동상 : 아세토니트릴/메탄올/1% 초산암모늄 혼합액 (45/45/10, v/v/v)
(4) 이동상 유량 : 1.0 mL/min
(5) 시료주입량 : 20 μL
(6) 검출기파장 : UV 246 nm
나) 검량선의 작성
표준용액을 농도별로 일정량 취하여 액체크로마토그래프에 각각 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피이크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.
다) 표준품의 크로마토그램
그림 1. 액체크로마토그래프에서 표준품의 크로마토그램 : 스피네토람-J형(8.0 분), 스피네토람-L형(8.9 분) 20 ng
0.02 mg/kg
마) 액체크로마토그래프․질량분석의 측정조건
(1) 칼럼 : C18 (2.0 mm I.D. × 100 mm, 3 ㎛) 또는 이와 동등한 것
(2) 칼럼온도 : 40℃
(3) 이동상 : 아세토니트릴/메탄올/1% 초산암모늄 혼합액 (45/45/10, v/v/v)
(4) 이동상 유량 : 0.2 mL/min
(5) 시료주입량 : 5 μL
(6) 이온화 : ESI positive-ion mode
(7) 분자량 범위 : 500 ～ 900
(8) Capillary temperature : 350℃
(9) Cone voltage : 137 V
| 머무름 시간 (분) | 분자량 | Ion monitored (m/z) |
| 5.6 | 748 | 749 |
| 6.5 | 760 | 761 |
위의 조건에서 얻어진 크로마토그램상의 피이크는 어느 측정조건에서도 표준용액 피이크의 머무름 시간과 일치하여야 한다. 주. 액체크로마토그래프․질량분석기상의 머무름 시간 및 mass spectrum으로 각 농약의 성분을 확인할 수 있다.
8) 정량시험
정성시험과 똑같은 조건에서 얻어진 시험결과에 의해 피이크 높이법 또는 피이크 면적법에 따라 정량한다.