4.1.3.26 아짐설푸론(Azimsulfuron), 벤설푸론-메칠(Bensulfuron-methyl), 클로르설푸론(Chlorsulfuron), 시노설푸론(Cinosulfuron), 사이클로설파무론(Cyclosulfamuron), 에톡시설푸론(Ethoxysulfuron), 플루세토설푸론(Flucetosulfuron), 할로설푸론-메칠(Halosulfuron-methyl), 이마조설푸론(Imazosulfuron), 아이오도설퓨론-메칠-나트륨(iodosulfuron-methyl-sodium), 메트설푸론-메칠(Metsulfuron-methyl), 피라조설푸론-에칠(Pyrazosulfuron-ethyl) 및 치펜설푸론-메칠(Thifensulfuron-methyl)
1) 시험법의 적용범위
곡류, 콩류
2) 분석원리
검체를 염화암모늄 수용액으로 산성화 시키고 아짐설푸론 등을 아세토니트릴로 추출한다. 산염기 분배법, 후로리실 컬럼 및 아미노프로필 카트리지(amino propyl cartridge)로 정제하여 액체크로마토그래프로 분석한다.
3) 장치
가) 액체크로마토그래프 : 자외선흡광검출기(UV photometric detector)
나) 액체크로마토그래프․질량분석기 (LC/MS)를 사용한다.
4) 시약 및 시액
가) 용매 : 잔류농약 시험용 또는 이와 동등한 것
나) 표준원액 : 아짐설푸론, 벤설푸론-메칠, 클로르설푸론, 시노설푸론, 사이클로설파무론, 에톡시설푸론, 플루세토설푸론, 할로설푸론-메칠, 이마조설푸론, 아이오도설퓨론-메칠-나트륨, 메트설푸론-메칠, 피라조설푸론-에칠 및 치펜설푸론-메칠을 각각 아세토니트릴에 녹여 100 mg/L이 되게 한다.
다) 표준용액 :
(1) Group Ⅰ : 치펜설푸론-메칠, 메트설루론-메칠, 클로르설프론, 아짐설푸론, 플루세토설퓨론, 벤설프론-메칠, 피라조설푸론-에칠 및 에톡시설푸론 표준원액을 아세토니트릴로 각각 5 mg/L이 되도록 혼합․희석하고 아세토니트릴/인산 완충용액 (50/50, v/v)을 이용하여 0.025, 0.1, 0.2, 0.5, 1.0 및 2.0 mg/L가 되게 한다.
(2) Group Ⅱ : 씨노설푸론, 이마조설푸론, 아이오도설퓨론-메칠-나트륨, 할로설푸론-메칠 및 싸이클로설파무론 표준원액을 아세토니트릴로 각각 10 mg/L이 되도록 혼합․희석하고 아세토니트릴/인산 완충용액 (50/50, v/v)을 이용하여 0.05, 0.2, 0.4, 1.0, 2.0, 3.0 mg/L가 되게 한다.
라) 후로리실：칼럼크로마토그래프용 후로리실(60～100 mesh)을 130℃에서 하룻밤 가열한 후 데시케이터에서 보관․사용한다.
마) 아미노프로필 카트리지(amino propyl cartridge)：아미노프로필(0.5 g)이 충진되어 있는 일회용 카트리지(용량 3 mL)
바) 인산완충용액 : 20 mM 인산이수소칼륨(KH2PO4) 수용액에 진한 인산을 가하여 pH 2.5로 맞춘다
사) 염화암모늄 수용액 : 0.2 M 염화암모늄(NH4Cl) 수용액에 진한 인산을 가하여 pH 2.5로 맞춘다
아) 기타시약 : 잔류농약 시험용 또는 특급
5) 시험용액의 조제
가) 추출 및 분배
검체[약 1 kg을 표준체 420 ㎛를 통과하도록 분쇄한 25 g]를 정밀히 달아 균질기 용기에 넣고 염화암모늄 수용액 25 mL를 가하여 10분간 정치한다. 아세토니트릴 100 mL을 넣은 후 2분간 균질화한다. 이를 여지가 깔려있는 부흐너깔때기로 감압여과하고, 아세토니트릴 50 mL로 잔사(residue) 및 용기를 씻어 내려 앞의 여액과 합친다. 합친 여액을 40℃에서 감압 농축하여 아세토니트릴을 날려 보낸 후 2% 인산일수소나트륨(Na2HPO4) 수용액 40 mL와 포화염화나트륨 용액 2 mL를 가한 후 1 N 수산화나트륨 용액으로 pH를 9.0으로 조절한다. 이 용액을 250 mL 용량의 분액깔때기로 옮기고 디클로로메탄/헥산 혼합액 (20/80, v/v) 50 mL를 가하여 2분간 격렬하게 진탕한다. 수용액 층을 비이커에 받고 6 N과 1 N 염산을 가하여 pH를 3.0으로 조절한다. 이때 염산 용액의 총 첨가량은 5 mL 미만으로 한다. 수용액을 별도의 250 mL 용량의 분액깔때기로 옮기고 디클로로메탄 30 mL씩으로 2회 분배한다. 분배된 디클로로메탄 용액을 40℃이하의 수욕 중에서 감압농축한 후 잔류물을 아세토니트릴/디클로로메탄 혼합액 (50/50, v/v) 10 mL에 녹인다.
나) 정제
안지름 1.1 cm, 길이 40 cm의 칼럼관에 후로리실 5 g, 다음에 무수황산나트륨 약 2 g을 충진한 후 디클로로메탄 25 mL를 가하여 상단에 소량의 디클로로메탄이 남을 정도로 유출시켜 버린다. 여기에 위의 아세토니트릴/디클로로메탄 혼합액 (50/50, v/v)에 녹인 시료용액 10 mL을 칼럼에 넣고 약 3 mL/min의 유속으로 흘린다. 표면이 노출되기 직전 아세토니트릴 50 mL을 가하여 유출시키고, 메탄올/아세토니트릴 혼합액 (10/90, v/v) 60 mL로 용출시켜 받는다. 이 용출액을 40℃에서 감압농축 한 후 아세토니트릴/디클로로메탄 혼합액 (50/50, v/v) 5 mL에 다시 녹여 아미노프로필 카트리지(amino propyl cartridge)로 정제한다. 아미노프로필 카트리지(amino propyl cartridge)에 디클로로메탄 5 mL로 용출시켜 활성화 한다. 여기에 위의 시료추출액 5 mL를 가한 후 2 mL/min의 유속으로 흘린다. 카트리지의 상단이 노출되기 직전 아세토니트릴/디클로로메탄 혼합액 (50/50, v/v) 5 mL, 메탄올 10 mL, 디클로로메탄/초산 혼합액 (100/0.2, v/v) 10 mL를 차례로 유출시키고, 디클로로메탄/초산 혼합액 (100/1, v/v) 10 mL로 용출시켜 받는다. 용출액을 40℃이하에서 질소농축한다. 잔류물을 아세토니트릴 2.5 mL에 잘 녹이고 인산완충용액 2.5 mL를 가하여 혼합한 후 시험용액으로 한다.
6) 시험조작
가) 액체크로마토그래프의 측정조건
(1) 칼럼 : C18 (4.0 mm × 250 mm, 5 ㎛)
(2) 검출기 : 자외선흡광검출기(UV photometric detector)(UV 240 nm)
(3) 칼럼온도 : 35℃
(4) 이동상 : 아세토니트릴/인산완충용액 혼합액 (45/55 , v/v)
(5) 이동상 유량 : 0.8 mL/min
(6) 시료 주입량 : 20 μL
나) 검량선의 작성
표준용액 1 그룹 및 2 그룹을 농도별로 일정량 취하여 액체크로마토그래프에 각각 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.
다) 정량한계
7) 정량시험
위의 조건에서 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이법 또는 피크 면적법에 따라 정량한다.
8) 확인시험
액체크로마토그래프․질량분석기상의 머무름 시간과 질량분석 스펙트럼으로 각 농약의 성분을 확인할 수 있다.
가) 액체크로마토그래프․질량분석기의 측정조건
(1) 칼럼 : C18 (15 cm × 2.1 mm ID, 3 ㎛) 또는 이와 동등한 것
(2) 칼럼온도 : 40℃
(3) 이동상 : 아세토니트릴/0.2% 초산 (35/65, v/v)
(4) 이동상 유량 : 0.3 mL/min
(5) 시료주입량 : 5 μL
(6) 이온화 : ESI positive-ion mode
(7) 분자량 범위 : 200～600
(9) Cone voltage : 87 V
표1. 액체크로마토그래프․질량분석기의 분석을 위한 이온
1) 시험법의 적용범위
곡류, 콩류
2) 분석원리
검체를 염화암모늄 수용액으로 산성화 시키고 아짐설푸론 등을 아세토니트릴로 추출한다. 산염기 분배법, 후로리실 컬럼 및 아미노프로필 카트리지(amino propyl cartridge)로 정제하여 액체크로마토그래프로 분석한다.
3) 장치
가) 액체크로마토그래프 : 자외선흡광검출기(UV photometric detector)
나) 액체크로마토그래프․질량분석기 (LC/MS)를 사용한다.
4) 시약 및 시액
가) 용매 : 잔류농약 시험용 또는 이와 동등한 것
나) 표준원액 : 아짐설푸론, 벤설푸론-메칠, 클로르설푸론, 시노설푸론, 사이클로설파무론, 에톡시설푸론, 플루세토설푸론, 할로설푸론-메칠, 이마조설푸론, 아이오도설퓨론-메칠-나트륨, 메트설푸론-메칠, 피라조설푸론-에칠 및 치펜설푸론-메칠을 각각 아세토니트릴에 녹여 100 mg/L이 되게 한다.
다) 표준용액 :
(1) Group Ⅰ : 치펜설푸론-메칠, 메트설루론-메칠, 클로르설프론, 아짐설푸론, 플루세토설퓨론, 벤설프론-메칠, 피라조설푸론-에칠 및 에톡시설푸론 표준원액을 아세토니트릴로 각각 5 mg/L이 되도록 혼합․희석하고 아세토니트릴/인산 완충용액 (50/50, v/v)을 이용하여 0.025, 0.1, 0.2, 0.5, 1.0 및 2.0 mg/L가 되게 한다.
(2) Group Ⅱ : 씨노설푸론, 이마조설푸론, 아이오도설퓨론-메칠-나트륨, 할로설푸론-메칠 및 싸이클로설파무론 표준원액을 아세토니트릴로 각각 10 mg/L이 되도록 혼합․희석하고 아세토니트릴/인산 완충용액 (50/50, v/v)을 이용하여 0.05, 0.2, 0.4, 1.0, 2.0, 3.0 mg/L가 되게 한다.
라) 후로리실：칼럼크로마토그래프용 후로리실(60～100 mesh)을 130℃에서 하룻밤 가열한 후 데시케이터에서 보관․사용한다.
마) 아미노프로필 카트리지(amino propyl cartridge)：아미노프로필(0.5 g)이 충진되어 있는 일회용 카트리지(용량 3 mL)
바) 인산완충용액 : 20 mM 인산이수소칼륨(KH2PO4) 수용액에 진한 인산을 가하여 pH 2.5로 맞춘다
사) 염화암모늄 수용액 : 0.2 M 염화암모늄(NH4Cl) 수용액에 진한 인산을 가하여 pH 2.5로 맞춘다
아) 기타시약 : 잔류농약 시험용 또는 특급
5) 시험용액의 조제
가) 추출 및 분배
검체[약 1 kg을 표준체 420 ㎛를 통과하도록 분쇄한 25 g]를 정밀히 달아 균질기 용기에 넣고 염화암모늄 수용액 25 mL를 가하여 10분간 정치한다. 아세토니트릴 100 mL을 넣은 후 2분간 균질화한다. 이를 여지가 깔려있는 부흐너깔때기로 감압여과하고, 아세토니트릴 50 mL로 잔사(residue) 및 용기를 씻어 내려 앞의 여액과 합친다. 합친 여액을 40℃에서 감압 농축하여 아세토니트릴을 날려 보낸 후 2% 인산일수소나트륨(Na2HPO4) 수용액 40 mL와 포화염화나트륨 용액 2 mL를 가한 후 1 N 수산화나트륨 용액으로 pH를 9.0으로 조절한다. 이 용액을 250 mL 용량의 분액깔때기로 옮기고 디클로로메탄/헥산 혼합액 (20/80, v/v) 50 mL를 가하여 2분간 격렬하게 진탕한다. 수용액 층을 비이커에 받고 6 N과 1 N 염산을 가하여 pH를 3.0으로 조절한다. 이때 염산 용액의 총 첨가량은 5 mL 미만으로 한다. 수용액을 별도의 250 mL 용량의 분액깔때기로 옮기고 디클로로메탄 30 mL씩으로 2회 분배한다. 분배된 디클로로메탄 용액을 40℃이하의 수욕 중에서 감압농축한 후 잔류물을 아세토니트릴/디클로로메탄 혼합액 (50/50, v/v) 10 mL에 녹인다.
나) 정제
안지름 1.1 cm, 길이 40 cm의 칼럼관에 후로리실 5 g, 다음에 무수황산나트륨 약 2 g을 충진한 후 디클로로메탄 25 mL를 가하여 상단에 소량의 디클로로메탄이 남을 정도로 유출시켜 버린다. 여기에 위의 아세토니트릴/디클로로메탄 혼합액 (50/50, v/v)에 녹인 시료용액 10 mL을 칼럼에 넣고 약 3 mL/min의 유속으로 흘린다. 표면이 노출되기 직전 아세토니트릴 50 mL을 가하여 유출시키고, 메탄올/아세토니트릴 혼합액 (10/90, v/v) 60 mL로 용출시켜 받는다. 이 용출액을 40℃에서 감압농축 한 후 아세토니트릴/디클로로메탄 혼합액 (50/50, v/v) 5 mL에 다시 녹여 아미노프로필 카트리지(amino propyl cartridge)로 정제한다. 아미노프로필 카트리지(amino propyl cartridge)에 디클로로메탄 5 mL로 용출시켜 활성화 한다. 여기에 위의 시료추출액 5 mL를 가한 후 2 mL/min의 유속으로 흘린다. 카트리지의 상단이 노출되기 직전 아세토니트릴/디클로로메탄 혼합액 (50/50, v/v) 5 mL, 메탄올 10 mL, 디클로로메탄/초산 혼합액 (100/0.2, v/v) 10 mL를 차례로 유출시키고, 디클로로메탄/초산 혼합액 (100/1, v/v) 10 mL로 용출시켜 받는다. 용출액을 40℃이하에서 질소농축한다. 잔류물을 아세토니트릴 2.5 mL에 잘 녹이고 인산완충용액 2.5 mL를 가하여 혼합한 후 시험용액으로 한다.
6) 시험조작
가) 액체크로마토그래프의 측정조건
(1) 칼럼 : C18 (4.0 mm × 250 mm, 5 ㎛)
(2) 검출기 : 자외선흡광검출기(UV photometric detector)(UV 240 nm)
(3) 칼럼온도 : 35℃
(4) 이동상 : 아세토니트릴/인산완충용액 혼합액 (45/55 , v/v)
(5) 이동상 유량 : 0.8 mL/min
(6) 시료 주입량 : 20 μL
나) 검량선의 작성
표준용액 1 그룹 및 2 그룹을 농도별로 일정량 취하여 액체크로마토그래프에 각각 주입한다. 얻어진 크로마토그램상의 각 피크 높이 또는 면적을 구하여 검량선을 작성한다.
다) 정량한계
| 대상성분 | 정량한계 (mg/kg) |
| 치펜설푸론-메칠 | 0.005 |
| 메트설푸론-메칠 | 0.005 |
| 클로르설푸론 | 0.005 |
| 아짐설푸론 | 0.005 |
| 플루세토설푸론 | 0.01 |
| 벤설푸론-메칠 | 0.01 |
| 피라조설푸론-에칠 | 0.005 |
| 에톡시설푸론 | 0.01 |
| 씨노설푸론 | 0.005 |
| 이마조설푸론 | 0.005 |
| 아이오도설퓨론-메칠-나트륨 | 0.005 |
| 할로설푸론-메칠 | 0.01 |
| 싸이클로설파무론 | 0.01 |
위의 조건에서 얻어진 크로마토그램상의 피크가 표준용액 피크의 머무름 시간과 일치할 때 피크 높이법 또는 피크 면적법에 따라 정량한다.
8) 확인시험
액체크로마토그래프․질량분석기상의 머무름 시간과 질량분석 스펙트럼으로 각 농약의 성분을 확인할 수 있다.
가) 액체크로마토그래프․질량분석기의 측정조건
(1) 칼럼 : C18 (15 cm × 2.1 mm ID, 3 ㎛) 또는 이와 동등한 것
(2) 칼럼온도 : 40℃
(3) 이동상 : 아세토니트릴/0.2% 초산 (35/65, v/v)
(4) 이동상 유량 : 0.3 mL/min
(5) 시료주입량 : 5 μL
(6) 이온화 : ESI positive-ion mode
(7) 분자량 범위 : 200～600
(9) Cone voltage : 87 V
표1. 액체크로마토그래프․질량분석기의 분석을 위한 이온
| 분석성분 |
머무름 시간 (min) |
분자량 |
Ion monitored (m/z) |
| 치펜설푸론-메칠 | 3.6 | 387 | 388 |
| 메트설푸론-메칠 | 4.0 | 381 | 382 |
| 클로르설푸론 | 4.7 | 357 | 358 |
| 아짐설푸론 | 5.5 | 424 | 425 |
| 플루세토설푸론 | 7.9 | 487 | 488 |
| 벤설푸론-메칠 | 8.2 | 410 | 411 |
| 피라조설푸론-에칠 | 12.9 | 414 | 415 |
| 에톡시설푸론 | 15.7 | 398 | 399 |
| 시노설푸론 | 4.0 | 413 | 414 |
| 이마조설푸론 | 8.3 | 412 | 413 |
| 아이오도설퓨론-메칠-나트륨 | 8.6 | 529 | 508, 530 |
| 할로설푸론-메칠 | 13.9 | 434 | 435 |
| 사이클로설파무론 | 21.8 | 421 | 422 |